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      組氨酸-瓊脂糖凝膠

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      別 名
      Cas號
      M D L
      分子式
      分子量
      產品參數 親和層析(affinity chromatography)是一種吸附層析,配體(或配基)和相應的配基(或配體)發生特異性結合,而這種結合在一定的條件下又是可逆的。所以將配體(或配基)固相化后,就可以使存在液相中的相應配基(或配體)選擇性地結合在固相載體上,借以與液相中的其他蛋白質分開,達到分離提純的目的。親和層析具有高效、快速、簡便等優點
      性狀 組氨酸-瓊脂糖凝膠FF是一種將組氨酸鍵合在瓊脂糖微球上形成的親和層析分離介質。該產品保留了天然多糖化合物極好的親水性及大網架結構,與生物活性大分子有很好的相容性,具有高動態吸附容量,快流速操作等特點,適用于抗體等富含共軛氨基酸殘基的蛋白質、多肽的分離純化。
      1. 裝柱
        1.1 根據分離目標性質配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
        1.2 將所取凝膠抽干,用初始緩沖液(按凝膠∶緩沖液=3∶1的比例)配成勻漿并脫氣。
        1.3 將層析柱垂直固定,底端用水或緩沖液潤濕并保持一段液位。
        1.4 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,使凝膠在柱內自由沉降,水封層析柱,沉降過夜。
        1.5 連結好柱子頂端活動柱頭,打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時操作流速流過5柱體積,再使用1.5倍的操作流速流過5柱體積,調節適配柱頭,使其盡量貼近膠面,最后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
        注意:所有操作過程不能引入氣泡,保證裝膠的均勻度。
        2. 平衡
        將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱,觀察檢測器的變化,直到電導、pH等參數不變。平衡緩沖液可選擇中性pH的Tris-鹽酸、PBS、檸檬酸-檸檬酸鈉、巴比妥、醋酸-醋酸鈉等緩沖液。
        3. 上樣
        切換轉換閥進行上樣,上樣量根據樣品的性質和層析介質的量進行選擇,也可進行線性實驗找到最佳上樣量;樣品的預處理:用平衡液配制,0.45mm微孔濾膜過濾。
        4. 沖洗
        用2-3個柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱,觀察檢測器的變化,直到電導、pH等參數不變,此時未吸附的組分被清洗出去。
        5. 洗脫
        組氨酸-瓊脂糖凝膠FF的洗脫可用恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫,一般推薦增大鹽濃度的梯度洗脫進行。
        6. 再生
        用平衡緩沖液按操作流速沖洗3-5個柱體積。
        若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
        7. 在位清洗(CIP)
        含1mol/LNaCl的平衡緩沖液洗2個柱體積,0.1%TritonX-100洗2個柱體積,平衡緩沖液洗2個柱體積。
        在位清洗可有效去除介質上的雜質,同時介質上的熱源也可基本去除。
      貯存 1. 包裝:聚胺酯瓶密封包裝,規格為25毫升、100毫升、250毫升和1升。   2. 貯存:20%乙醇,4°C冰箱保存。   3. 運輸:4°C、常壓、避光。   4. 保質期:5-10年。
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