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丁基-陶瓷/瓊脂糖
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| 1308131391 | 0 | ￥0 |
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| M D L | |
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| 產(chǎn)品參數(shù) | 疏水作用層析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根據(jù)分子表面疏水性差別來(lái)分離蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子的表面常常暴露著一些疏水性基團(tuán)，我們把它稱(chēng)為疏水補(bǔ)丁，疏水補(bǔ)丁可以與疏水性層析介質(zhì)發(fā)生疏水性相互作用而結(jié)合。不同的分子由于疏水性不同，它們與疏水性層析介質(zhì)之間的疏水性作用力強(qiáng)弱不同，疏水作用層析就是依據(jù)這一原理分離純化蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子的 |
| 性狀 | 丁基-陶瓷/瓊脂糖凝膠是一種將四碳鏈丁基鍵合在剛性陶瓷/瓊脂糖凝膠復(fù)合微球上形成的弱疏水性疏水層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品的基質(zhì)采用“shellinagel”模式設(shè)計(jì)，剛性結(jié)構(gòu)不可壓縮，耐壓，沉降快，易裝柱，且保留了天然多糖化合物極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有高動(dòng)態(tài)吸附容量，不含帶電集團(tuán)，無(wú)離子交換等其他作用，快流速操作等特點(diǎn)，廣泛適用于疏水性能較強(qiáng)的蛋白質(zhì)、多肽的生物大分子實(shí)驗(yàn)室規(guī)模制備和生物制藥、生物工程的大工業(yè)化制備，典型應(yīng)用如重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、人集落刺激因子(M-CSF)、表皮生成因子(EGF)的生產(chǎn)以及單克隆抗體的純化。
1. 裝柱 1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。 1.2 將所取凝膠抽干，用初始緩沖液（按凝膠∶緩沖液=3∶1的比例）配成勻漿并脫氣。 1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。 1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，水封層析柱，沉降1-2小時(shí)即可。 1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過(guò)5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過(guò)5柱體積，調(diào)節(jié)適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。 注意：所有操作過(guò)程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。 2. 平衡 將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。平衡緩沖液根據(jù)目標(biāo)物性質(zhì)和pH要求可選擇含一定濃度的硫酸銨或硫酸鈉的Tris-鹽酸、PBS、檸檬酸-檸檬酸鈉、巴比妥、醋酸-醋酸鈉等緩沖液。 3. 上樣 切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣，上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可進(jìn)行線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量；樣品的預(yù)處理：用含一定濃度的硫酸銨或硫酸鈉的平衡液配制，0.45mm微孔濾膜過(guò)濾。 4. 沖洗 用2-3個(gè)柱體積的含一定濃度的硫酸銨或硫酸鈉的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變，此時(shí)未吸附的組分被清洗出去。 5. 洗脫 丁基-陶瓷/瓊脂糖凝膠的洗脫可用恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫，一般推薦減小鹽濃度的梯度洗脫進(jìn)行。 6. 再生 用不含鹽的平衡緩沖液按操作流速?zèng)_洗3-5個(gè)柱體積。 若有失活蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。 7. 在位清洗(CIP) 對(duì)于強(qiáng)結(jié)合蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)，可采用以下流程進(jìn)行在位清洗：1mol/LNaOH洗2個(gè)柱體積，4mol/L尿素或3mol/L鹽酸胍洗2個(gè)柱體積，70%乙醇或30%異丙醇洗2個(gè)柱體積，平衡緩沖液洗2個(gè)柱體積。 在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，同時(shí)介質(zhì)上的熱源也可基本去除。 |
| 貯存 | 1. 包裝：聚胺酯瓶密封包裝，規(guī)格為250毫升、1升、5升和10升。 2. 貯存：20%乙醇，4°C冰箱保存。 3. 運(yùn)輸：4°C、常壓、避光。 4. 保質(zhì)期：5-10年。 |
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