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大鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒
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| 貨號 | 規(guī)格 | 貨期 | 庫存 | 價(jià)格 | 促銷價(jià) | 訂購 |
| 13081166061 | 200ml | 咨詢客服 | 0 | ￥1698 |
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| 產(chǎn)品參數(shù) | 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。首先取抗凝血按體積比1:1的比例加全血及組織稀釋液混勻，根據(jù)稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：
情況A: 稀釋后血液樣本小于5mL時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下： 1. 取一支15ml離心管，依次小心加入試劑A、試劑D（體積比為3:2，試劑總量與稀釋后的血液樣本量相等。如稀釋后的血液樣本為5ml，則先后加入試劑A 3ml、試劑D 2ml），制成梯度界面，各液面分層一定要清晰。 2. 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上，400-550g，離心20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時(shí)間越長，具體離 心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）。 3. 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為五層。第一層為稀釋液層。第二層為透明試劑D液層。第三層為環(huán)狀乳白色單核細(xì)胞層。第四層為透明試劑A液層。第五層為紅細(xì)胞層。 4. 用吸管小心吸取第二層試劑D層和第三層乳白色細(xì)胞層到另一15ml離心管中，往所得離心管中加入10ml清洗液，混勻細(xì)胞。 5. 250g，離心10min。 6. 棄上清。 7. 用吸管以5ml清洗液重懸所得細(xì)胞。 8. 250g，離心10min。 9. 重復(fù)6、7、8，棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。 10. 差異貼壁法純化細(xì)胞 （1） 用單核細(xì)胞無血清培養(yǎng)基或單核細(xì)胞完全培養(yǎng)基以1.5-3×106個(gè)/ml的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中，放于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。 （2） 2-4小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。 （3） 10-24小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。 （4） 不貼壁的為淋巴細(xì)胞。 注： a) 無血清培養(yǎng)基中不含任何動物成分，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加10%自體血漿或2-8%的胎牛血清。 b) 完全培養(yǎng)基中含2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）。 c) 由于每種細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異可將所得細(xì)胞分開已達(dá)簡單的純化目的，此法成本相對較低。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽性或陰性分選。 情況B: 血液樣本大于等于5mL時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下： 1. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，依次小心加入試劑A、試劑D（試劑A與試劑D體積比為5:3，試劑總量與稀釋后的樣本量相等），制成梯度界面。 2. 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（最大離心力可至1000g），離心20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心時(shí)間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。 3. 剩余步驟同“情況A”中步驟3至步驟10。 注意事項(xiàng)： 1. 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最好在取血2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過6h后 分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。 2. 稀釋后血液樣本體積小于3ml時(shí)，試劑A和試劑D用量分別為2ml和1ml。 3. 本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。 4. 吸取過多的單核細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。 5. 吸取過多的單核細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。 |
| 性狀 | 本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液。抗凝外周血可在分離液中分層。離心時(shí)，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降；此時(shí)，淋巴細(xì)胞及其他單個(gè)核細(xì)胞仍處于分離液上層，紅細(xì)胞污染可忽略不計(jì)。大部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
適用于從動物抗凝血液中分離淋巴細(xì)胞，無菌條件下所分離的淋巴細(xì)胞可用于細(xì)胞培養(yǎng)等。本品僅供科研使用。 密度：1.0830±0.0001g/ml 本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。 產(chǎn)品內(nèi)容： 試劑Ａ 200mL 試劑D 200mL 樣本稀釋液（贈品） 200mL 清洗液（贈品） 200mL |
| 貯存 | 18℃-25℃保存，有效期兩年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件下操作。無菌條件下操作，啟封后常溫保存。如4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。 |
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