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小鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
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| 貨號 | 規(guī)格 | 貨期 | 庫存 | 價格 | 促銷價 | 訂購 |
| 13081166051 | 200ml | 咨詢客服 | 0 | ￥1698 |
| 別 名 | |
| Cas號 | |
| M D L | |
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| 產(chǎn)品參數(shù) | A．本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液復(fù)溫至18-22℃。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取血后2小時內(nèi)進行實驗，血液提取后存放時間越長細胞活性越低。
B．實驗過程中，如需稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。 C．最優(yōu)抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會影響細胞活性。應(yīng)注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。 D．實驗操作時，不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過高的液體，手套中的粉末顆粒及高內(nèi)毒素會激活淋巴細胞從而降低細胞得率及活性。 E．本實驗不可使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。 F．吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。吸取過多的淋巴細胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。 G．如需進行B、T細胞計數(shù)，則需血液貯藏時間不得多于10小時，否則將導(dǎo)致細胞被激活，得率降低。 H．為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進行二次離心。 I．細胞純度可在步驟10后使用瑞氏染色方法確定，細胞活性可用臺盼藍處理后觀察。 J．由于各品牌離心機的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。 分離方法： 一、當(dāng)血液樣本小于3ml時，實驗方法如下： 1. 取一支15ml離心管，加入3ml分離液置于18-22℃復(fù)溫。 2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃，400g離心20分鐘。低溫（如4℃）離心會降低細胞得率。 3. 離心后，用吸管小心吸出分離液上層（包含淋巴細胞的細胞層）0.5cm以上的上清液部分，棄去。 4. 用吸管小心吸取分離液層及淋巴細胞層至于另一新離心管內(nèi)。 5. 在步驟4中所得離心管中加入10ml 細胞洗滌液混勻。 6. 250g離心10分鐘。 7. 棄上清。 8. 用吸管以5ml 細胞洗滌液重懸所得細胞。 9. 250g離心10分鐘。 10. 棄上清。重復(fù)步驟7、8、9，后以0.5ml后續(xù)試驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。 二、當(dāng)血液樣本大于3ml時，實驗方法如下： 1. 當(dāng)血液樣本粘度過高或血液樣本大于等于3ml時，最優(yōu)稀釋方法：將血液于18-22℃以250g離心10分鐘，棄去血漿，補充添加全血及組織稀釋液，添加量為所棄去血漿體積的1.5-2倍，混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚浴? 2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入分離液（加入量與稀釋后的血液樣本體積相等），置于18-22℃復(fù)溫。 3. 將經(jīng)稀釋處理的血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃，400g離心20分鐘。低溫（如4℃）離心會降低細胞得率。注：加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二。 4. 剩余步驟同“情況一”中步驟3至步驟10。 |
| 性狀 | 各種動物外周血淋巴細胞分離液
200ml 全血及組織稀釋液 200ml 細胞洗滌液 200ml 本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降；此時，淋巴細胞及其他單個核細胞仍處于分離液上層，紅細胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。 適用于從動物抗凝血液中分離淋巴細胞，無菌條件下分離的淋巴細胞可用于培養(yǎng)。本品僅供科研使用。 |
| 貯存 | 18℃-25℃避光保存，有效期兩年,保存溫度較低10℃易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。 |
滬公網(wǎng)安備 31012002003054號