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      BCA蛋白濃度測定試劑盒

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      別 名
      Cas號
      M D L
      分子式
      分子量
      產品參數 產品簡介:

      堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+, Cu+與BCA試劑形成紫藍色的絡合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100,Tween不影響檢測結果,但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中,若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

      操作說明:

      一 . 微孔酶標儀法

      1. 配制工作液: 根據標準品和樣品數量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內穩定。

      2. 稀釋標準品:取10微升BSA標準品用PBS稀釋至100微升(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 2, 4,6,8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標準品孔中,加PBS補足到20微升。

      3. 將樣品作適當稀釋(最好多做幾個梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差,標準線前面的點可能不很準確,所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。

      4. 各孔加入200微升BCA工作液,37℃放置15-30分鐘。用酶標儀測定A562nm,根據標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時,應注意防止因水分蒸發影響檢測結果。

      二 . 分光光度計法

      如沒有酶標儀,可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

      注意事項:

      1. 長期不用時,Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,如發現細菌污染則應丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現結晶沉淀時,可37℃溫育使其完全溶解, 不影響使用。

      2. 樣品中若含有較多干擾物質時,請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒

      3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
      性狀 包裝(500微孔) 保存
      BCA試劑 100ml 室溫
      Cu試劑 3ml 室溫
      PBS稀釋液 30ml 室溫
      BSA蛋白標準 (5mg/ml BSA) 1ml -20℃
      貯存 本試劑盒自訂購之日起一年內有效。
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