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      DH5α感受態細胞

      英文名:
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      別 名
      Cas號
      M D L
      分子式
      分子量
      產品參數 產品簡介:
      本公司生產的DH5 α 感受態細胞是采用大腸桿菌DH5 α 菌株經特殊工藝制備得到,可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測,轉化效率可達 108,-70 ℃保存3-5 個月轉化效率不發生改變。 基因型: supE44 △lacU169 (φ80 lacZ△M15 )hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
      特 點: 一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產物可與pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現β 互補,可用于藍白斑篩選。
      操作方法:(以下操作均按無菌條件的標準進行)
      1 、將感受態細胞置于冰上融化,以下實驗以 100ul 感受態細胞為例。
      2 、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA,注意目的DNA的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一,輕輕旋轉離心管以混勻內容物,冰浴放置30 分鐘。
      3 、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒,然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘,注意不要搖動離心管。
      4 、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的SOC 或LB培養基,37℃ 180rpm 振蕩培養1 小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。
      5 、取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或LB平板,37℃倒置培養 12-16 小時。涂布用量可根據具體實驗來調整,如轉化的DNA總量較多,可取100ul 左右的轉化產物涂板;反之,如轉化的 DNA總量較少,可取200-300ul 的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少,可通過離心后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
      注意事項:
      1、感受態細胞應保存在-70 ℃,不可反復凍融,否則其轉化效率將會降低。
      2、實驗過程中應嚴格無菌操作,防止其它 DNA的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
      3、轉化時,轉化效率與外源 DNA的濃度在一定范圍內成正比,但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
      4、轉化率的計算:轉化率=產生菌落的總數/ 鋪板DNA總量。
      5、為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接產物,以重新轉化,將損失降到最低。
      性狀
      貯存 -70℃保存,運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70 ℃保存至少 6 個月。
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