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      動物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒

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      分子式
      分子量
      產(chǎn)品參數(shù) 產(chǎn)品簡介:

      本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),提取組織和細(xì)胞的基因組DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料,能夠高效、專一吸附DNA,可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。 提取的基因組DNA片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,包括酶切、 PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

      操作步驟:

      使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入休積請參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。

      1、樣品的處理:

      a、細(xì)胞:取1×106-1×107個懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,12000rpm離心1min收集細(xì)胞,貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶消化處理,再用預(yù)冷的PBS吹打成細(xì)胞懸液,然后12000rpm離心1min收集細(xì)胞,盡量除去上清,加200ul溶液A,振蕩至徹底混勻。

      b、組織:組織量不宜過大,一般不要超過25mg,可以使用勻漿器勻漿,最好用液氮研磨成粉末狀,再用預(yù)冷的PBS或無菌水充分懸浮,然后12000rpm離心1min收集細(xì)胞,盡量除去上清,加200ul溶液A,振蕩至徹底混勻。

      2、向懸浮液中加入20ul 的RNase A (10mg/ml),55℃放置15min。

      3、加入20ul 的蛋白酶K( 10mg /ml ),充分顛倒混勻,55℃水浴消化,細(xì)胞消化時間較短,組織消化時間較長,一般需要1-3個小時才能完成(鼠尾需要消化過夜)。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,直至樣品消化完全為止。消化完全的指標(biāo)是:液體清亮及粘稠。

      4、加入200ul體積溶液B,充分顛倒混勻,如出現(xiàn)白色沉淀,可放置于75℃ 15-30min,沉淀即會消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說明樣品消化不徹底,可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純,還有可能導(dǎo)致堵塞吸附柱。

      5、加入200ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中。

      6、12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

      9、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

      10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心2min。

      11、可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中,12000rpm離心2min,即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。
      性狀 試劑盒內(nèi)容: 50T 100T
      RNase A 1ml 1ml×2
      蛋白酶K 1ml 1ml×2
      溶液A 10ml 20ml
      溶液B 10ml 20ml
      漂洗液 15ml 15ml×2
      洗脫液 10ml 20ml
      吸附柱 50個 100個
      收集管 50個 100個
      說明書 1份 1份
      貯存 室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。
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