β—胡蘿卜素與番茄紅素提取分離和測(cè)定

β—胡蘿卜素與番茄紅素提取分離和測(cè)定

一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;

1、學(xué)習(xí)從天然產(chǎn)物中提取有機(jī)化合物的方法。

 2、學(xué)習(xí)用薄層層析法檢驗(yàn)有機(jī)化合物的基本原理，點(diǎn)樣，展開(kāi)和計(jì)算Rf值的 方法。

 二。儀器和試劑 

儀器三角瓶(50m1) 、分液漏斗(150ml) 、蒸餾瓶(50ml)、普通蒸餾裝置 (或減壓蒸餾裝置)、漏斗、色譜柱、硅膠薄層板、量筒、燒杯、層析缸。試劑 胡蘿卜、丙酮、石油醚(bp30~60"C)、 硅膠(層析用，200~300 目)、無(wú)水硫酸 鈉、石油醚(bp60~90C).丙酮:石油醚(1: 9) (V/V)。

 三、實(shí)驗(yàn)方案. 

1、含類(lèi)胡蘿卜素石油醚溶液的制備 將新鮮胡蘿卜洗凈、擦干,切去尾部，切碎。稱(chēng)取碎鮮胡蘿卜[1] 10g于小研 缽中,研碎。碎胡蘿卜移至50mL三角燒瓶中，每次用丙酮10mL萃取2次, . 再用石油醚(bp30~60C) 萃取固體兩次，每次10mL。把石油醚溶液加到丙酮 液中。在分液漏斗中將混合液與50mL飽和氯化鈉溶液[2]振蕩，分去下層， 用蒸餾水洗滌上層液兩次，每次50mL，分去水，用無(wú)水硫酸鈉干燥石油醚液 (約1h) ,把混合液倒入50mL圓底燒瓶中，熱水浴加熱蒸餾，除去溶劑，得 固體。在制得的固體物加入3mL石油醚(bp60- 90C)拌硅膠1g,在通風(fēng)櫥內(nèi) 抽干，得黃色硅膠顆粒，待上柱。

2、裝柱和分離

 取20cm*1cm色譜柱一根，垂直裝置，以50ml三角燒瓶作洗脫液的接受器。用 鑷子取少許脫脂棉[3]放于干凈的色譜柱底部，輕輕塞緊，再在脫脂綿上蓋一 層厚0.Scm的海石砂(或用- -張比柱內(nèi)徑略小的濾紙代替),關(guān)閉活塞，向柱內(nèi) 倒入石油醚(bp60-90C) 至約為柱高的3/4處，打開(kāi)活塞，控制流出速度為 1滴/s。 通過(guò)一干燥的玻璃漏斗慢慢加入層析硅膠。用洗耳球輕輕敲打柱身， 使填裝緊密。當(dāng)裝填到3/4時(shí)，再在上面加一-層0.5cm厚的海石砂，操作時(shí)一 直保持_上述流速，注意不能使液面低于砂子的上層。當(dāng)液面流至離海石砂面 1cm時(shí)，立即從玻璃漏斗加入已制備好的含胡蘿卜素的黃色硅膠，隨后用 0.5ml石油醚洗下管壁的硅膠，如此連續(xù)2一 -3 次，直至洗凈為止，然后在色譜 柱上裝上滴液漏斗，用石油醚(bp60-90C)作洗脫劑進(jìn)行洗脫，洗1滴/s。 當(dāng)有一-黃色的譜帶分出，待黃色組分絕大部分洗出時(shí)，把洗脫劑換成1: 9丙酮 - -石油醚(bp60-90C)混液作洗脫劑進(jìn)行洗脫，控制流出速度如前(這混液 洗脫劑有助于混合物中極性較大的組分移動(dòng))，又可分出兩個(gè)黃色組分。在 45- -90min 內(nèi)，柱中物料將全部洗脫出來(lái)。觀察這些物料通過(guò)柱子的移動(dòng)情況。 在三角燒瓶中收集3份洗出液。用紙色譜、薄層色譜對(duì)各段洗出液進(jìn)行色譜分 析。

3.薄層色譜法

 樣品:柱色譜法中洗脫出的份樣品液 展開(kāi)劑: 1: 9丙酮一石油醚溶液 薄層板的制備:取3片載波體，洗凈，晾干。

 在50ml燒杯中放置3g硅膠G，逐漸加入0.5%cmC水溶液8ml,調(diào)成均勻的 糊狀，將此糊狀物傾于.上述潔凈的載玻片圣桑，用手將帶漿的載玻片在水平的 桌面上做上下輕微的顫動(dòng)，并不時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)方向，制成厚薄均勻，表面光潔的平整 的薄層板，然后放在水平桌面上，在室溫放置晾干后放入烘箱中，緩慢升溫至 110C，恒溫0.5h，取出，稍冷后置干燥器中備用。

       點(diǎn)樣:取出上述制好的薄層板，分別在距一-端 點(diǎn)lcm處用鉛筆輕輕劃- -橫線(xiàn)作 為起始線(xiàn)。用毛細(xì)管吸取少量樣品液，在一 -塊板的起點(diǎn)線(xiàn)上點(diǎn)第-一個(gè)色帶的樣 品液，根據(jù)柱色譜分離的色帶，依次點(diǎn)樣，如果樣點(diǎn)顏色較淺，可重復(fù)點(diǎn)樣， 重復(fù)點(diǎn)樣前必須待前次樣點(diǎn)揮干后進(jìn)行。樣點(diǎn)直徑不超過(guò)2mm。 展開(kāi):待樣點(diǎn)干燥后，小心地放入已加入展開(kāi)劑的250ml廣口瓶中進(jìn)行展開(kāi)。 在瓶的內(nèi)壁貼- -張高5cm，環(huán)繞周長(zhǎng)4/5的濾紙，下面浸入展開(kāi)劑中，以使容 器內(nèi)被展開(kāi)劑蒸氣飽和。點(diǎn)樣一端浸 入展開(kāi)劑0.5cm (樣點(diǎn)不浸泡在展開(kāi)劑中)。 蓋好瓶塞，觀察展開(kāi)劑前沿上升離板的上端1cm處取出，盡快用鉛筆在展開(kāi)劑 上升的前沿處劃一-記號(hào)，晾干后，量出展開(kāi)劑和樣點(diǎn)移動(dòng)的距離，計(jì)算Rf值。

四、注意事項(xiàng)

1，本實(shí)驗(yàn)采取的工藝不同于其他工藝，體現(xiàn)在原料粉碎時(shí)加入了穩(wěn)定劑(5ml 氨水和35ml乙醇)來(lái)防止β一胡蘿卜素被氧化，由此可提高提取率。 

2、色譜柱填裝緊密與否，對(duì)分離效果很有影響。若柱中留有氣泡或各部分松緊 不勻(更不能有斷層或暗溝)時(shí)，會(huì)影響滲濾速度和顯色的均勻。但如果填裝 時(shí)過(guò)分敲擊，又會(huì)因太緊密而流速太慢。 3、加入砂子的目的是。在加料是不致把吸附劑沖起，影響分離效果。

 4、為了保持色譜柱的均- -性，使整個(gè)吸附劑浸泡在溶液或溶液中是必要的。否 則當(dāng)柱中溶液流干時(shí)。柱身干裂，影響滲濾和顯色的均- -性。

 5、若不用滴液漏斗，也可用每次倒入10ml洗脫劑的方法進(jìn)行洗脫

 6、載玻片上涂層要均勻，既不應(yīng)有紋路、帶團(tuán)粒，也不應(yīng)有能看到玻璃的薄涂 料點(diǎn)。

 7、點(diǎn)樣用的毛細(xì)管必須專(zhuān)用，不得弄混。

 8、點(diǎn)樣時(shí)，使毛細(xì)管液面剛好接觸到薄層(濾紙)既可，均勻點(diǎn)樣過(guò)重而使薄 層破壞。

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