β—胡蘿卜素與番茄紅素提取分離和測定

β—胡蘿卜素與番茄紅素提取分離和測定

一實驗目的 

1、學習從天然產物中提取有機化合物的方法。

 2、學習用薄層層析法檢驗有機化合物的基本原理，點樣，展開和計算Rf值的 方法。

 二。儀器和試劑 

儀器三角瓶(50m1) 、分液漏斗(150ml) 、蒸餾瓶(50ml)、普通蒸餾裝置 (或減壓蒸餾裝置)、漏斗、色譜柱、硅膠薄層板、量筒、燒杯、層析缸。試劑 胡蘿卜、丙酮、石油醚(bp30~60"C)、 硅膠(層析用，200~300 目)、無水硫酸 鈉、石油醚(bp60~90C).丙酮:石油醚(1: 9) (V/V)。

 三、實驗方案. 

1、含類胡蘿卜素石油醚溶液的制備 將新鮮胡蘿卜洗凈、擦干,切去尾部，切碎。稱取碎鮮胡蘿卜[1] 10g于小研 缽中,研碎。碎胡蘿卜移至50mL三角燒瓶中，每次用丙酮10mL萃取2次, . 再用石油醚(bp30~60C) 萃取固體兩次，每次10mL。把石油醚溶液加到丙酮 液中。在分液漏斗中將混合液與50mL飽和氯化鈉溶液[2]振蕩，分去下層， 用蒸餾水洗滌上層液兩次，每次50mL，分去水，用無水硫酸鈉干燥石油醚液 (約1h) ,把混合液倒入50mL圓底燒瓶中，熱水浴加熱蒸餾，除去溶劑，得 固體。在制得的固體物加入3mL石油醚(bp60- 90C)拌硅膠1g,在通風櫥內 抽干，得黃色硅膠顆粒，待上柱。

2、裝柱和分離

 取20cm*1cm色譜柱一根，垂直裝置，以50ml三角燒瓶作洗脫液的接受器。用 鑷子取少許脫脂棉[3]放于干凈的色譜柱底部，輕輕塞緊，再在脫脂綿上蓋一 層厚0.Scm的海石砂(或用- -張比柱內徑略小的濾紙代替),關閉活塞，向柱內 倒入石油醚(bp60-90C) 至約為柱高的3/4處，打開活塞，控制流出速度為 1滴/s。 通過一干燥的玻璃漏斗慢慢加入層析硅膠。用洗耳球輕輕敲打柱身， 使填裝緊密。當裝填到3/4時，再在上面加一-層0.5cm厚的海石砂，操作時一 直保持_上述流速，注意不能使液面低于砂子的上層。當液面流至離海石砂面 1cm時，立即從玻璃漏斗加入已制備好的含胡蘿卜素的黃色硅膠，隨后用 0.5ml石油醚洗下管壁的硅膠，如此連續2一 -3 次，直至洗凈為止，然后在色譜 柱上裝上滴液漏斗，用石油醚(bp60-90C)作洗脫劑進行洗脫，洗1滴/s。 當有一-黃色的譜帶分出，待黃色組分絕大部分洗出時，把洗脫劑換成1: 9丙酮 - -石油醚(bp60-90C)混液作洗脫劑進行洗脫，控制流出速度如前(這混液 洗脫劑有助于混合物中極性較大的組分移動)，又可分出兩個黃色組分。在 45- -90min 內，柱中物料將全部洗脫出來。觀察這些物料通過柱子的移動情況。 在三角燒瓶中收集3份洗出液。用紙色譜、薄層色譜對各段洗出液進行色譜分 析。

3.薄層色譜法

 樣品:柱色譜法中洗脫出的份樣品液 展開劑: 1: 9丙酮一石油醚溶液 薄層板的制備:取3片載波體，洗凈，晾干。

 在50ml燒杯中放置3g硅膠G，逐漸加入0.5%cmC水溶液8ml,調成均勻的 糊狀，將此糊狀物傾于.上述潔凈的載玻片圣桑，用手將帶漿的載玻片在水平的 桌面上做上下輕微的顫動，并不時轉動方向，制成厚薄均勻，表面光潔的平整 的薄層板，然后放在水平桌面上，在室溫放置晾干后放入烘箱中，緩慢升溫至 110C，恒溫0.5h，取出，稍冷后置干燥器中備用。

       點樣:取出上述制好的薄層板，分別在距一-端 點lcm處用鉛筆輕輕劃- -橫線作 為起始線。用毛細管吸取少量樣品液，在一 -塊板的起點線上點第-一個色帶的樣 品液，根據柱色譜分離的色帶，依次點樣，如果樣點顏色較淺，可重復點樣， 重復點樣前必須待前次樣點揮干后進行。樣點直徑不超過2mm。 展開:待樣點干燥后，小心地放入已加入展開劑的250ml廣口瓶中進行展開。 在瓶的內壁貼- -張高5cm，環繞周長4/5的濾紙，下面浸入展開劑中，以使容 器內被展開劑蒸氣飽和。點樣一端浸 入展開劑0.5cm (樣點不浸泡在展開劑中)。 蓋好瓶塞，觀察展開劑前沿上升離板的上端1cm處取出，盡快用鉛筆在展開劑 上升的前沿處劃一-記號，晾干后，量出展開劑和樣點移動的距離，計算Rf值。

四、注意事項

1，本實驗采取的工藝不同于其他工藝，體現在原料粉碎時加入了穩定劑(5ml 氨水和35ml乙醇)來防止β一胡蘿卜素被氧化，由此可提高提取率。 

2、色譜柱填裝緊密與否，對分離效果很有影響。若柱中留有氣泡或各部分松緊 不勻(更不能有斷層或暗溝)時，會影響滲濾速度和顯色的均勻。但如果填裝 時過分敲擊，又會因太緊密而流速太慢。 3、加入砂子的目的是。在加料是不致把吸附劑沖起，影響分離效果。

 4、為了保持色譜柱的均- -性，使整個吸附劑浸泡在溶液或溶液中是必要的。否 則當柱中溶液流干時。柱身干裂，影響滲濾和顯色的均- -性。

 5、若不用滴液漏斗，也可用每次倒入10ml洗脫劑的方法進行洗脫

 6、載玻片上涂層要均勻，既不應有紋路、帶團粒，也不應有能看到玻璃的薄涂 料點。

 7、點樣用的毛細管必須專用，不得弄混。

 8、點樣時，使毛細管液面剛好接觸到薄層(濾紙)既可，均勻點樣過重而使薄 層破壞。

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